期刊简介
《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》是中华医学会主办并直接出版的高级医学科技期刊，以反映我国外科领域重大研究进展，努力促进国内外学术交流为办刊宗旨。本刊 以高、中级耳鼻咽喉头颈外科外科专业医生及相关的研究人员为读者对象，主要报道相关领域领先的科研成果和临床诊治经验以及对临床工作有指导作用的基础理论 研究。主要栏目有论著、荟萃分析、述评、专论、综述、病例报告、经验与教训、学术争鸣、讲座等
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首页>中华耳鼻咽喉头颈外科杂志
- 杂志名称：中华耳鼻咽喉头颈外科杂志
- 主管单位：中华耳鼻咽喉科杂志
- 主办单位：中国科学技术协会
- 国际刊号：11-5330/R
- 国内刊号：11-5330/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中华人民共和国新闻出版总署评为“双效期刊”，入选中国期刊方阵期刊收录：统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 哥白尼索引(波兰), 万方收录(中), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 上海图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
豚鼠鼻粘膜一氧化氮合酶表达
周卫东；章如新；李兆基；周水淼
关键词：豚鼠, 鼻粘膜, 原位杂交, 磷酸缓冲溶液, 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸, 石蜡切片, 阴性对照, 一氧化氮合酶, 地高辛标记探针, 冰冻切片, 酶组织化学染色, 生理病理过程, 检测试剂盒, 孵育液, 动物实验中心, 血小板聚集, 血管平滑肌, 生物学活性, 生物合成酶, 生理学意义
摘要：一氧化氮（nitric oxide, NO）是新近发现的一种具有多种而复杂生物学活性的小分子物质，是生物体内重要的信使分子和效应分子，参与体内众多的生理病理过程。NO具有松弛血管平滑肌、调节血液循环、抑制血小板聚集等作用，并被认为是一种重要的神经递质［1］。催化NO的生物合成酶称一氧化氮合酶（nitric oxide synthase, NOS），本检测旨在探索NOS在鼻粘膜上的分布及其生理学意义。 一、材料和方法 1.豚鼠12只，发育营养正常，雌雄不论，体重350 g左右（本校动物实验中心提供）。 2.制片：豚鼠灌注固定处死后，迅速取下双侧鼻甲粘膜，分别置入10%中性甲醛固定，1侧鼻粘膜6 h后移入15%蔗糖过夜，鼻粘膜包埋在OCT水溶性包埋剂中，做5 μm厚的冰冻切片；另1侧硅烷化载玻片行4 μm石蜡切片。 3.酶组织化学染色：冰冻切片过0.01 mol/L 的磷酸缓冲溶液（pH 7.4）后，待其干燥，加入含有0.8 g/L的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠（nicotinamide dinucleotide phosphate-Na4,NADPH-Na4, 美国Sigma公司）、0.6 g/L的硝基四氮醋蓝和0.3% Triton-X100的孵育液，置于37℃恒温箱内孵育1.5 h，显色后0.01 mol/L磷酸缓冲溶液冲洗3次，终止反应，常规酒精脱水、透明、封片。阴性对照：孵育液内不含NADPH-Na4。 4．内皮型NOS(endothelial NOS, eNOS)原位杂交检测步骤：采用eNOS原位杂交检测试剂盒（武汉博士德公司）。石蜡切片脱腊至水，蛋白酶K消化5 min，暴露mRNA核酸片段，cDNA双链探针变性后，每张切片加10 μL含地高辛标记探针的eNOS原位杂交液，湿盒中37℃杂交18 h，充分洗涤后，用免疫组化ABC法显示探针与鼻粘膜靶核酸形成的杂交体。阴性对照为省去滴加eNOS探针杂交液，其余方法和步骤不变。
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